1. 引言

西藏洛隆县位于中国西南部，是一个高原地区，农牧业是当地居民的主要经济来源。在这个地区，牛、羊是重要的畜牧业品种，但由于地理环境的特殊性，这些动物容易受到口蹄疫等传染病的威胁[1]。同时，羊在这个地区也是重要的反刍动物，但羊小反刍病也是一个常见的疾病。因此，对于口蹄疫和羊小反刍病的抗体检测研究具有重要的意义。

口蹄疫是一种由口蹄疫病毒引起的急性传染病，主要影响牛、羊等反刍动物[2]。该病毒具有高度的传染性和致病性，能够引起口腔、蹄部、乳房等部位的病变，严重影响动物的生产性能和经济效益。在西藏洛隆县这样的高原地区，由于气候寒冷、氧气稀薄等特殊环境因素，动物的免疫力相对较弱，容易受到口蹄疫的侵袭[3]。据统计，自2023年8月5日以来，洛隆县部分牛只出现疑似口蹄疫症状，发病牛14头。8月13日，经国家口蹄疫参考实验室确诊，该起疫情为O型口蹄疫疫情。疫情发生后，当地对67头病畜及同群畜进行了扑杀和无害化处理[4]。因此，对于牛、羊的口蹄疫抗体检测研究，可以为当地畜牧业的发展提供科学依据，及时发现和控制口蹄疫的传播，保障动物的健康和农牧民的经济收入。

羊小反刍病是一种由羊小反刍病毒引起的急性传染病，主要影响羊等反刍动物。该病毒具有高度的传染性和致病性，能够引起羊的消化系统病变，导致食欲不振、腹泻、体重下降等症状，严重影响羊的生产性能和经济效益[5]。在西藏洛隆县这样的高原地区，由于气候寒冷、饲料质量不高等因素，羊的免疫力相对较弱，容易受到羊小反刍病的侵袭。因此，对于羊小反刍抗体检测研究，可以为当地畜牧业的发展提供科学依据，及时发现和控制羊小反刍病的传播，保障羊的健康和农牧民的经济收入。

研究口蹄疫和羊小反刍病的抗体检测，可以通过检测动物体内的特定抗体水平来判断动物是否感染了相应的病毒。本次选用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法，该方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，可以快速、准确地检测动物体内的抗体水平，为疾病的早期诊断和防控提供科学依据[6]。

2. 材料与方法

2.1. 材料

2.1.1. 口蹄疫与小反刍兽疫选用材料

洛隆县的牛、羊等动物，一般在每年的春天和秋天会安排接种疫苗。接种疫苗方法是肌肉注射，羊的小反刍兽疫为每年春季或秋季接种，接种方式是皮下注射，每只羊注射1 mL。在疫苗注射过后，需要对疫苗抗体合格情况做一监测，以此达到动物疫苗研发及突发疾病的调控目的。

2.1.2. 血清

本次研究完成了对洛隆县五个乡动物口蹄疫和羊的小反刍兽疫两种疫病的免疫抗体检测，所用牛的血清样本共150份，羊的血清样本共150份，均由西藏洛隆县动物疫病防控中心提供。

2.1.3. 主要仪器与试剂

超纯水机(ELIX10)、自动酶标仪(Rayto RT-6100)、恒温培养箱(GNP-9050)、微量移液器(eppendorf)均由西藏农牧学院西藏高原动物疫病研究自治区高校重点实验室提供。小反刍兽疫病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒(试剂盒厂家：青岛立见诊断技术发展中心，试剂盒批号：020171906)；口蹄疫O型间接血凝抗体检测试剂盒(试剂盒厂家：中国农业科学院兰州兽疫研究所，试剂盒批号：20200428201)；口蹄疫A型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒(试剂盒厂家：中国农业科学院兰州兽疫研究所，试剂盒批号：20200303103-2)；口蹄疫Asi-I型ELISA检测试剂盒(试剂盒厂家：哈尔滨元亨生物药业有限公司，试剂盒批号：CSFV20161112)。

2.2. 检测方法

2.2.1. 动物口蹄疫检测

使用前将动物支原体抗体ELISA检测试剂盒置室温20 min后，取出微孔板，设定阴阳对照孔和样本孔，分别加入阴性对照、阳性对照各50 µL，并向待测样品孔先加待测血清10 µL，再加样品稀释液40 µL，随后向阴阳对照孔和样品孔中分别加入辣根过氧化物酶标记的检测抗原100 µL，加样完毕后，用封板摸密封反应孔，置37℃恒温箱中温育60 min，然后取出微孔板，弃去液体，用吸水纸吸干多余水分，并向所有孔中加满洗涤液，静置1 min，甩去洗涤液，再用吸水纸吸干多余水分，如此重复洗板5次；随后每孔加入A液、B液各50 µL，37℃避光孵育15 min；最后每孔各加入终止液50 µL，15 min内在450 nm波长处测定各孔的OD值。

2.2.2. 羊小反刍疫病检测

使用ELISA试验方法，首先采集样本并确保其新鲜和卫生。然后制备样本，将其处理成适用于ELISA的样本液。接下来，进行涂板处理，将抗体溶液加入微孔板中，使其固定在板上。然后准备标准曲线，使用已知浓度的标准品建立曲线，以便测定样本中目标蛋白质的含量。将样本加入涂有抗体的微孔板中，使目标蛋白质与抗体结合。通过洗板步骤去除未结合的物质，确保准确性。随后加入底物溶液，与结合的蛋白质反应生成可测量的信号。使用酶标仪读取吸光度，根据标准曲线计算蛋白质浓度。最后分析数据，得出结论并记录结果。ELISA试验用于小反刍兽疫和牛瘟的病原学诊断及疫苗质量监控，但成本较高。

2.3. 结果判断

试验有效性：阳性对照孔OD值平均值 ≥ 1.00；阴性对照孔OD值平均值 ≤ 0.15。

临界值计算：临界值 = 阴性对照孔平均值 + 0.15。

阴性判断：样品OD值 < 临界值，样品为阳性。

阳性判断：样品OD值 > 临界值，样品为阳性。

3. 结果

3.1. 牛口蹄疫免疫抗体检测结果

如下表1所示，在牛O型口蹄疫免疫抗体检测结果中，不同地区的样品数、阴性数和免疫率存在差异。其中，达龙乡的免疫率最高，为96.7%，玉西乡的免疫率最低，为80%。整体而言，合计的免疫率为88%。均达到国家要求的最低水平(免疫率 ≥ 70%)，表明洛隆县牛口蹄疫抗体免疫结果良好，进一步说明洛隆县针对牛口蹄疫的疫苗免疫工作落实到位。

牛Asi-I型口蹄疫抗体监测结果显示，不同地区的样品数、阴性数和免疫率存在差异，但在这个特定的时间点上，没有明显的变化趋势。整体而言，合计的免疫率为76.7%。达到国家规定水平(70%)，其中腊久乡的免疫率最高，为83.3%；新荣乡的免疫率最低，为70%。与牛O型口蹄疫相比，牛Asi-I型口蹄疫的免疫率较低。为了提高牛群对Asi-I型口蹄疫的免疫情况，需要加强防控措施，提高免疫率，以保障牛群的健康。

牛A型口蹄疫抗体监测结果显示，孜托镇的免疫率高达96.7%，为最高；新荣乡的免疫率为86.7%，为最低；合计的免疫率为92%。与牛O型和Asi-I型口蹄疫相比，牛A型口蹄疫的免疫率较高。这表明洛隆县牛群对A型口蹄疫的免疫情况最好。

Table 1. Monitoring results of immune antibody of bovine foot-and-mouth disease in Luolong County

表1. 洛隆县牛口蹄疫免疫抗体监测结果

3.2. 羊口蹄疫免疫抗体检测结果

如下表2，羊O型口蹄疫疫苗免疫率：孜托镇的免疫率为96.7%，为最高；新荣乡的免疫率为86.7%，为最低。综合来看，洛隆县针对羊O型口蹄疫的抗体免疫整体水平达到92%，符合国家要求，说明洛隆县羊O型口蹄疫的抗体免疫工作落实到位。新荣乡稍稍落后，需要进一步加强。

羊Asi-I型口蹄疫疫苗免疫率：达龙乡的免疫率为90%，为最高；腊久乡的免疫率为60%，为最低且未达到国家要求。综合来看，洛隆县针对羊Asi-I型口蹄疫的抗体免疫整体水平达到75.3%，符合国家要求，个别乡镇如达龙乡达到90%，但相比于羊O型口蹄疫来说，Asi-I型免疫情况整体偏低，腊久乡在疫情免疫中做得较差，需要进一步加强。

羊A型口蹄疫疫苗免疫率：玉西乡与腊久乡的免疫率为93.3%，为最高；达龙乡的免疫率为70%，正好达到国家免疫要求。综合来看，洛隆县针对羊A型口蹄疫的抗体免疫整体水平达到84.6%，符合国家要求，个别乡镇如玉西乡达到93.3%，相比于羊Asi-I型口蹄疫来说，A型免疫情况较好，达龙乡在疫情免疫中做得较差，需要进一步加强。

3.3. 羊小反刍兽疫免疫抗体检测结果

如表3，孜托镇和玉西乡的免疫率较低：免疫率分别为60%和46.6%。均未达到国家要求，这可能意味着这两个地区的羊群中存在较高比例的羊小反刍抗体阴性，需要进一步采取措施进行防控。达龙乡和腊久乡的免疫率较高：免疫率分别为80%和90%。这可能意味着这两个地区的羊群中存在较低比例的羊小反刍抗体阴性。但是整体免疫率为68.7%，没有达到国家最低要求。

Table 2. Monitoring results of sheep foot-and-mouth disease immune antibody in Luolong County

表2. 洛隆县羊口蹄疫免疫抗体监测结果

Table 3. Monitoring results of sheep peste des petits ruminants antibody in Luolong County

表3. 洛隆县羊小反刍兽疫抗体监测结果

4. 讨论

在洛隆县的五个乡中，分别对牛、羊的口蹄疫抗体检测情况做了统计，结果表明，牛的O型口蹄疫最好的是达龙乡达到了96.7%，次之是孜托镇达到93.3%，新荣乡O型口蹄疫抗体监测免疫率达到86.7%，最低的玉西乡也达到80%，整体阴性率为88%，这表明洛隆县牛口蹄疫抗体免疫结果良好，进一步说明洛隆县针对牛口蹄疫的疫苗免疫工作落实到位。洛隆县牛Asi-I型口蹄疫免疫抗体检测总体结果为76.7%，与牛O型口蹄疫相比，牛Asi-I型口蹄疫的免疫率较低。洛隆县牛A型口蹄疫免疫抗体检测结果的整体阴性率为92%，与牛O型和Asi-I型口蹄疫相比，牛A型口蹄疫的免疫率较高。

洛隆县羊的口蹄疫检测中，羊O型口蹄疫免疫抗体整体阴性率有92%，符合国家要求，洛隆县羊Asi-I型检测结果为75.3%，虽然达到国家要求，但相比于羊O型口蹄疫来说，Asi-I型免疫情况整体偏低，需要进一步加强。洛隆县羊A型口蹄疫的整体阴性率为84.6%，相比于羊Asi-I型口蹄疫来说，A型免疫情况较好，但与羊O型口蹄疫的阴性率相比还有一定的差距；洛隆县羊的小反刍兽疫抗体检测中，整体阴性率为68.7%，结果较差。没有达到国家最低要求。这主要是因为乡与乡之间的差距比较大，达龙乡和腊久乡的免疫率较高：免疫率分别为80%和90%。孜托镇和玉西乡的免疫率较低：免疫率分别为60%和46.6%。均未达到国家要求。所以在针对孜托镇和玉西乡提高免疫率，加强防控。

洛隆县在经过多年的生产实践中摸索，最终形成了一套完整的免疫程序，一般来说，初生的犊牛在90日龄左右会注射牛O型和亚洲I型的口蹄疫疫苗，在间隔6个月后，会注射A型口蹄疫疫苗，初免以后，间隔一个月再用这两种疫苗注射强化免疫，一般每隔4~6个月可以免疫一次[7]。注射疫苗时，配合使用东方牛疫健，每吨饲料添加牛疫健一到两公斤，混合均匀。疫苗前后使用，可以提高抗体水平，填补免疫空白期，延长牛口蹄疫，牛胸膜肺炎等疫苗的保护时间。也可与疫苗同时使用，增强免疫效果。全面替代牛口蹄疫血清抗体的新一代饲料添加剂。用药12小时降低死亡率，有效预防心肌炎。

基层各类动物疫病的预防一直是我国政府和畜牧兽医研究部门最重要的工作，每年的春天和秋天，都是动物疫情防控的重点[8]。依据国家要求，检测一定区域内家畜重大疫病的免疫情况及发病情况，依据于对某种动物疫苗免疫抗体的检测。本次对洛隆县5个乡镇动物口蹄疫与小反刍兽疫的检测结果表明：口蹄疫的免疫效果总体变化幅度较大，牛和羊的口蹄疫检测结果较好，进一步说明那曲洛隆县在牛羊的养殖方面较为成熟。但是羊小反刍兽疫免疫抗体检测结果表明，其没有达到国家最低要求。那曲洛隆县在针对不同地区要采取不同的防控措施，对一些免疫率低的地区要加强宣传，对待这种局面，应该通过以下几个方面去改善：首先是疫苗制备过程主要需要保障抗原的有效性和纯度。制备疫苗过程中，避免有毒有害化学物质及其他病菌侵入，保证纯度及质量，选择合适的疫苗株。疫苗株的选择应基于对目标疾病病原体的深入了解和研究。通过筛选和鉴定病原体的不同株系，选择具有高免疫原性和广谱保护效果的疫苗株，以提高疫苗的免疫效果。其次，对于动物科学的饲养管理是提高养羊业经济效益的重要保障。包括有饲料管理即合理提供适口性好营养均衡全面的饲料、配备适配的饲料加工工艺、各营养组分按照要求精准添加、混合料要求均匀混拌；疾病疫病防治，定期驱虫，及时接种疫苗，加强巡查圈舍，及时发现病畜给予救治；环境卫生也是影响羊群健康生长发育的重要因素，保持圈舍饲养环境的清洁卫生，定期消毒，保证水质等，都可以减少疾病发生，提高羊群的生长发育质量。

5. 结论

本次研究完成了对洛隆县五个乡动物口蹄疫和羊的小反刍兽疫两种疫病的免疫抗体检测，所用牛的血清样本共150份，羊的血清样本共150份，两种动物共300份血清样本，结果表明，牛的口蹄疫检测中，O型口蹄疫整体阴性率为88%，这表明洛隆县牛口蹄疫抗体免疫结果良好，进一步说明洛隆县针对牛口蹄疫的疫苗免疫工作落实到位。洛隆县牛Asi-I型口蹄疫免疫抗体检测总体结果为76.7%，与牛O型口蹄疫相比，牛Asi-I型口蹄疫的免疫率较低。洛隆县牛A型口蹄疫免疫抗体检测结果的整体阴性率为92%，与牛O型和Asi-I型口蹄疫相比，牛A型口蹄疫的免疫率较高。洛隆县羊的口蹄疫检测中，羊O型口蹄疫免疫抗体整体阴性率有92%，符合国家要求，洛隆县羊Asi-I型检测结果为75.3%，虽然达到国家要求，Asi-I型免疫情况整体偏低，需要进一步加强。洛隆县羊A型口蹄疫的整体阴性率为84.6%，洛隆县羊的小反刍兽疫抗体检测中，整体阴性率为68.7%，结果较差。没有达到国家最低要求。

参考文献